Вестерн-блоттинг: интерпретация результатов

Вестерн-блоттинг — широко используемый метод исследования, позволяющий обнаруживать белки с помощью антител. Важным этапом вестерн-блоттинга является анализ и интерпретация полученных результатов. При анализе вестерн-блоттинга необходимо учитывать множество аспектов, включая влияние различных методов иммуноблоттинга на результаты в зависимости от их сильных и слабых сторон. В этом видео перечислены три популярных метода иммуноблоттинга: колориметрический или хромогенный, хемилюминесцентный и флуоресцентный. Кроме того, обсуждаются методы анализа полос, количественного определения и нормализации в контексте анализа результатов вестерн-блоттинга. В видео представлены важные факторы и этапы, которые следует учитывать при анализе результатов вестерн-блоттинга, с использованием видеоматериалов из лаборатории Научно-исследовательского института Сент-Джозеф Гамильтон/Университета Макмастера и диаграмм, созданных с помощью BioRender. Это видео было создано Брук Д’Мелло, Ибрагимом Илахи, Аднаном Мойнуддином и Джулией Чжу в сотрудничестве с исследовательской программой Макмастерского университета по разъяснению сути вопроса. Мы также хотели бы отметить вклад доктора Такумы Иссики, который оказывал нам поддержку в этом процессе. Наконец, мы хотели бы поблагодарить доктора Кьетиля Аска и лабораторию Ask Lab за дополнительную помощь, ценные замечания и поддержку. Эпизод #1: Введение в вестерн-блоттинг: https://www.youtube.com/watch?v=eN7VmhPHyXw Эпизод #2: SDS-PAGE: https://www.youtube.com/watch?v=1UgkqDPMOow Эпизод #3: Влажный перенос: https://www.youtube.com/watch?v=vGb1blLPOyQ Эпизод #4: Электроблоттинг: https://www.youtube.com/watch?v=WMUOVCkrNGE Эпизод #5: Блокирование: https://www.youtube.com/watch?v=l712bE3RESo Эпизод #6: Иммунодетекция: https://www.youtube.com/watch?v=2WkF6uscsZ8 Это видео предназначено только для общего и образовательного использования. Подпишитесь на канал Demystifying Research McMaster. Авторские права принадлежат Университету Макмастера, 2022 г. Ссылки: Басс, Дж., Уилкинсон, Д., Ранкин, Д., Филлипс, Б., Шевечик, Н., Смит, К., и Атертон, П. (2017). Обзор технических аспектов применения вестерн-блоттинга в физиологических исследованиях. Scandinavian Journal of Medicine & Science in Sports, 27(1), 4–25. https://doi.org/10.1111/sms.12702 Методы обнаружения. (без даты). Лаборатории Bio-Rad. Получено 23 августа 2022 г. с https://www.bio-rad.com/en-us/applications-technologies/detection-methods?ID=LUSQ6KKG4 Флуоресцентный вестерн-блоттинг. (без даты). Лаборатории Bio-Rad. Получено 23 августа 2022 г. с https://www.bio-rad.com/en-us/category/fluorescent-western-blotting?ID=PMJ5J7TU86LJ Гош, Р., Гильда, Дж. Э., и Гомес, А. В. (2014). Необходимость и стратегии повышения уверенности в точности вестерн-блоттинга. Экспертный обзор протеомики, 11(5), 549–560. https://doi.org/10.1586/14789450.2014.939635 Анализ изображений и количественная оценка для вестерн-блоттинга. (без даты). Лаборатории Bio-Rad. Получено 23 августа 2022 г. с сайта https://www.bio-rad.com/en-us/applications-technologies/image-analysis-quantitation-for-western-blotting?ID=PQEERM9V5F6X Сойер, А. (2018, 19 сентября). Выбор правильного метода обнаружения для вашего вестерн-блота. BioTechniques. https://www.biotechniques.com/news/choosing-the-right-detection-method-for-your-western-blot/